Reaksyon ng aglutinasyon - RA(mula sa lat. agglutinatio- adhesion) ay isang simpleng reaksyon kung saan ang mga antibodies ay nagbubuklod sa mga corpuscular antigens (bacteria, erythrocytes o iba pang mga cell, hindi matutunaw na mga particle na may mga antigen na na-adsorbed sa kanila, pati na rin ang mga macromolecular aggregates). Ito ay nangyayari sa pagkakaroon ng mga electrolyte, halimbawa, kapag ang isotonic sodium chloride solution ay idinagdag.

Ang iba't ibang mga opsyon para sa agglutination reaction ay ginagamit: malawak, indicative, indirect, atbp. Ang agglutination reaction ay ipinapakita sa pamamagitan ng pagbuo ng mga flakes o sediment

Ginagamit ang RA para sa:

pagpapasiya ng mga antibodies sa serum ng dugo ng mga pasyente, halimbawa, na may brucellosis (Wright, Heddelson reaction), typhoid fever at paratyphoid fever (Vidal reaction) at iba pang mga nakakahawang sakit;

pagpapasiya ng pathogen na nakahiwalay sa pasyente;

pagpapasiya ng mga pangkat ng dugo gamit ang monoclonal antibodies laban sa erythrocyte alloantigens.

Upang matukoy ang mga antibodies sa isang pasyente ilagaydetalyadong agglutination reaksyon: idagdag sa mga dilution ng serum ng dugo ng pasyente diagnosticum(suspensyon ng mga napatay na mikrobyo) at pagkatapos ng ilang oras ng pagpapapisa ng itlog sa 37 °C, ang pinakamataas na serum dilution (serum titer) ay nabanggit, kung saan naganap ang agglutination, ibig sabihin, nabuo ang isang precipitate.

Ang kalikasan at bilis ng agglutination ay nakasalalay sa uri ng antigen at antibodies. Ang isang halimbawa ay ang mga kakaibang pakikipag-ugnayan ng diagnosticums (O- at R-antigens) na may mga tiyak na antibodies. Agglutination reaksyon sa O-diagnosticum(bacteria na pinatay ng init, pinapanatili ang init-stable O-antigen) ay nangyayari sa anyo ng fine-grained agglutination. Ang agglutination reaction na may H-diagnosticum (bacteria na pinatay ng formaldehyde, pinapanatili ang thermolabile flagellar H-antigen) ay magaspang at mas mabilis na nagpapatuloy.

Kung kinakailangan upang matukoy ang pathogen na nakahiwalay sa pasyente, ilagay nagpapahiwatig na reaksyon ng agglutination, gamit ang diagnostic antibodies (agglutinating serum), i.e., ang serotyping ng pathogen ay isinasagawa. Ang isang indikatibong reaksyon ay isinasagawa sa isang glass slide. Ang isang purong kultura ng pathogen na nakahiwalay mula sa pasyente ay idinagdag sa isang patak ng diagnostic agglutinating serum sa isang pagbabanto ng 1:10 o 1:20. Ang isang kontrol ay inilalagay sa malapit: sa halip na serum, isang patak ng sodium chloride solution ang inilapat. Kapag lumitaw ang flocculent sediment sa isang patak na naglalaman ng serum at microbes, a malawak na reaksyon ng agglutination sa mga test tube na may pagtaas ng mga dilution ng agglutinating serum, kung saan idinagdag ang 2-3 patak ng suspensyon ng pathogen. Ang aglutination ay isinasaalang-alang ng dami ng sediment at ang antas ng linaw ng likido. Ang reaksyon ay itinuturing na positibo kung ang agglutination ay sinusunod sa isang pagbabanto na malapit sa titer ng diagnostic serum. Kasabay nito, ang mga kontrol ay isinasaalang-alang: ang serum na diluted na may isotonic sodium chloride solution ay dapat na transparent, ang suspensyon ng microbes sa parehong solusyon ay dapat na pantay na maulap, nang walang sediment.

Ang iba't ibang kaugnay na bakterya ay maaaring pagsama-samahin ng parehong diagnostic agglutinating serum, na nagpapahirap sa kanilang pagkakakilanlan. Samakatuwid ginagamit nila adsorbed agglutinating sera, kung saan ang mga cross-reacting antibodies ay tinanggal sa pamamagitan ng adsorption sa mga kaugnay na bakterya. Ang nasabing sera ay nagpapanatili ng mga antibodies na partikular lamang sa isang partikular na bacterium. Ang paggawa ng espesyal na monoreceptor diagnostic agglutinating sera ay iminungkahi ni A. Castellani (1902).

Hindi direktang (passive) hemagglutination reaksyon(RNGA, RPGA) ay batay sa paggamit ng mga erythrocytes na may mga antigen o antibodies na na-adsorbed sa kanilang ibabaw, ang pakikipag-ugnayan nito sa mga kaukulang antibodies o antigens ng serum ng dugo ay nagiging sanhi ng mga erythrocytes na magkadikit at mahulog sa ilalim ng pagsubok. tubo o cell V sa anyo ng scalloped sediment (Larawan 13.2). Sa kaso ng isang negatibong reaksyon, ang mga pulang selula ng dugo ay tumira ■ sa anyo ng isang "button". Karaniwan, ang mga antibodies ay nakikita sa RNGA gamit ang isang antigenic erythrocyte diagnosticum, na mga erythrocytes na may adsorbed. sa ang mga ito ay may mga antigens. Minsan ginagamit ang mga diagnostic na anti-A erythrocyte, kung saan na-adsorbed ang mga antibodies. Halimbawa, ang botulinum toxin ay maaaring matukoy sa pamamagitan ng pagdaragdag ng erythrocyte antibody botulinum toxin dito (ang reaksyong ito ay tinatawag na baligtarin ang hindi direktang reaksyon ng hemagglutination- RONG). Ginagamit ang RNGA upang masuri ang mga nakakahawang sakit at matukoy ang gonadotropic hormone V ihi kapag nagtatag ng pagbubuntis, upang matukoy ang hypersensitivity sa mga gamot, hormone at sa ilang iba pang mga kaso.

COMBES REACTION

(Coombs test) - isang paraan para sa pagtukoy ng Rh antibodies sa ibabaw ng mga pulang selula ng dugo, na nagiging sanhi ng pag-ulan ng mga globulin sa serum ng dugo. Ang pagsusulit na ito ay ginagamit upang masuri ang hemolytic anemia sa mga sanggol na may Rh incompatibility na may pagkasira ng pulang selula ng dugo.

Reaksyon ng coagglutination. Ang mga pathogen cell ay tinutukoy gamit ang staphylococci na paunang ginagamot na may immune diagnostic serum. Staphylococci na naglalaman ng protina A, pagkakaroon ng isang affinity para sa Fc fragment ng immunoglobulins, nonspecifically adsorb antimicrobial antibodies, na pagkatapos ay nakikipag-ugnayan sa mga aktibong sentro na may kaukulang microbes na nakahiwalay mula sa mga pasyente. Bilang resulta ng coagglutination, ang mga natuklap ay nabuo na binubuo ng staphylococci, diagnostic serum antibodies at ang nakitang microbe.

Hemagglutination inhibition reaction(RTGA) ay batay sa blockade, pagsugpo sa mga viral antigen ng immune serum antibodies, bilang resulta kung saan ang mga virus ay nawawalan ng kakayahang pagsama-samahin ang mga pulang selula ng dugo (Larawan 13.3). Ginagamit ang RTGA upang masuri ang maraming mga sakit na viral, ang mga sanhi ng ahente nito (mga virus ng trangkaso, tigdas, rubella, tick-borne encephalitis, atbp.) ay maaaring pagsama-samahin ang mga pulang selula ng dugo ng iba't ibang mga hayop.

1. Isang grupo ng mga doktor mula sa WHO ang dumating sa India upang tukuyin ang mga pasyenteng may polio at tumulong sa pagsasagawa ng unibersal na pagbabakuna laban sa polio. Sa isa sa mga nayon na sinuri, isang 6 na taong gulang na batang lalaki ang dinala sa mga doktor mula sa isang malaking pamilya na nagkasakit 5 araw na ang nakakaraan. Biglang tumaas ang temperatura, nagkaroon ng matinding sakit ng ulo, paulit-ulit na pagsusuka, pananakit ng mga braso at binti. Sa pagsusuri: mataas na temperatura, matinding kahinaan, mga sintomas ng meningeal, nabawasan ang tono ng kalamnan sa kanang binti, nanghina nang husto ang mga reflexes ng litid, nakalaylay ang paa. Sa panahon ng pagbutas ng spinal canal, ang cerebrospinal fluid ay dumaloy sa ilalim ng mas mataas na presyon, ang bilang ng mga lymphocytes ay nadagdagan, at walang bakterya ang nakahiwalay. Ang isang paunang pagsusuri ng "paralytic form ng poliomyelitis" ay ginawa. Paano nahawa ang batang lalaki? Paano isinasagawa ang partikular na aktibong pag-iwas sa polio? May panganib bang makahawa sa ibang mga bata sa pamilyang ito, ano ang dapat gawin?

Sagot: Ang batang lalaki ay maaaring nahawahan sa pamamagitan ng fecal-oral route sa pamamagitan ng pagkain, tubig, at gayundin sa pamamagitan ng airborne droplets. Ang pangunahing hakbang para sa pag-iwas sa polio ay ang pagbabakuna na may live culture vaccine mula sa 3 serotypes ng Sabin strains. Sa Russia ito ay ginagamit pagbabakuna sa polio para sa oral administration na ginawa ng Institute of Poliomyelitis at Viral Encephalitis na pinangalanan. M.P. Chumakova. Ang bakuna ay isang trivalent na paghahanda ng attenuated Sabin strains ng polio virus type 1, 2, 3, na nakuha mula sa isang pangunahing kultura ng African green monkey kidney cells. . Ang mga batang may edad na 3 buwan hanggang 6 na taon ay napapailalim sa regular na pagbabakuna sa polio. Ang mga pagbabakuna sa oral polio vaccine ay isinasagawa gamit ang 2 o 4 na patak ng bakuna nang pasalita nang tatlong beses sa 3, 4, 5 at 6 na buwan na may tatlong muling pagbabakuna sa 18, 20 buwan at 14 na taon. Ang maysakit na batang lalaki ay dapat na maospital, at lahat ng iba pang mga anak ng pamilyang ito ay dapat mabakunahan ng live na bakunang polio.

1. Komposisyon at paggamit ng trivalent polymer-subunit liquid influenza vaccine (influenza)

Ito ay isang molekular na bakuna. Komposisyon: surface Ag ng influenza virus ng tatlong subtype (A/H1N1, A/H3N2, B). Application: para sa pag-iwas sa trangkaso

Kard ng pagsusulit Blg. 23

Ang reaksyon ay isinasagawa upang makita ang mga pathogen antigen sa materyal ng pagsubok sa pamamagitan ng pagdaragdag ng immune serum dito. Sa pagkakaroon ng isang homologous antigen, ang mga antibodies ay nagbubuklod, samakatuwid, pagkatapos ng pagdaragdag ng mga erythrocytes na sensitized ng antigen, ang kanilang aglutinasyon ay hindi nangyayari, na kung saan ay tinasa bilang isang positibong resulta. Upang gawing mas sensitibo ang reaksyon, ang tiyak na immune serum ay idinagdag sa materyal na pansubok sa kaunting halaga (2 hemagglutinating unit). Ang immune serum titer ay unang tinutukoy gamit ang RNGA. Ang isang hemagglutinating unit ay ang pinakamataas na dilution ng serum na nagiging sanhi ng pagdikit ng mga pulang selula ng dugo.

Pamamaraan. Magdagdag ng 0.025 ml ng 1% na solusyon ng normal na rabbit serum sa mga balon ng polystyrene plates o agglutination tubes at gumawa ng serial 2-fold dilution ng test material. Pagkatapos ay idinagdag ang 0.025 ml ng immune serum sa lahat ng mga balon, ang plato ay inalog at iniwan ng 30 minuto sa temperatura na 37ºC o para sa 1 oras sa temperatura ng silid. Susunod, magdagdag ng 0.025 ml ng antigenic diagnosticum sa lahat ng mga balon, iling at iwanan ng 2 oras, pagkatapos ay isinasaalang-alang ang mga resulta.

Kapag isinasagawa ang reaksyong ito, ang isang immune serum specificity control ay idinaragdag sa control para sa RNHA, na binubuo ng isang partikular na antigen, immune serum (2, 1, 0.5 hemagglutinating unit) at isang suspensyon ng sensitized erythrocytes.

Ginagamit din ang RTNGA upang makita ang mga partikular na antibodies (kumpleto at humaharang), kung saan ang isang dosed na halaga ng antigen ay idinagdag sa test serum. Kung naglalaman ito ng mga antibodies, kung gayon ang mga ito ay nakagapos ng antigen, samakatuwid, pagkatapos magdagdag ng mga erythrocytes na na-sensitized ng mga antibodies (ika-2 yugto ng RTNGA), ang mga erythrocyte ay hindi magkakadikit.

Salamat sa paggamit ng kaunting halaga ng antigen (2 neutralizing doses), ang reaksyon ay lubhang sensitibo. Ang bilang ng mga neutralizing doses sa paghahanda ng antigen ay tinutukoy gamit ang RNGA, habang ang mga serial 2-fold dilution ng antigen ay ginagawa sa isang 1% na solusyon ng normal na rabbit serum at isang antibody erythrocyte diagnosticum ay idinagdag sa mga balon. Ang neutralizing na dosis ng antigen ay itinuturing na pinakamataas na pagbabanto nito, na nagbibigay ng kumpletong pagdirikit ng sensitized erythrocytes.

Bago ang reaksyon, ang test sera ay diluted 1:5-1:10 at inactivated sa temperatura na 56°C sa loob ng 30 minuto. Upang ma-adsorb ang hemagglutinins, isang 50% na suspensyon ng formalinized o sariwang hugasan na erythrocytes ng tupa ay idinagdag sa serum sa rate na 0.1 ml ng suspensyon bawat 1 ml ng diluted serum. Ang pinaghalong ay inalog at incubated para sa 30 minuto sa 37ºC o 1 oras sa room temperatura, pagkatapos kung saan ang mga pulang selula ng dugo ay precipitated sa pamamagitan ng centrifugation. Maaari mong iwanan ang serum sa refrigerator hanggang sa susunod na araw upang latak ang mga pulang selula ng dugo.

Kapag nagsasagawa ng isang eksperimento, ang materyal ng pagsubok ay natunaw sa isang 1% na solusyon ng normal na serum ng kuneho sa dami ng 0.025 ml sa mga balon ng isang panel ng microtiter. Pagkatapos ay 2 neutralizing doses ng antigen sa dami ng 0.025 ml ay idinagdag sa bawat balon. Ang mga plato ay inalog at iniwan sa loob ng 30 minuto sa 37 °C o para sa 1 oras sa temperatura ng silid. Pagkatapos ay idinagdag ang 0.025 ml ng antibody erythrocyte diagnosticum sa lahat ng mga balon. Ang mga plato ay inalog at incubated para sa 1.5-2 na oras sa temperatura ng kuwarto, pagkatapos kung saan ang mga resulta ng reaksyon ay isinasaalang-alang. Maaari ring gawin ang accounting sa susunod na araw. Ang titer ng test serum ay itinuturing na pinakamataas na pagbabanto nito kung saan ang mga pulang selula ng dugo ay hindi magkakadikit.

Ang eksperimento ay sinamahan ng mga sumusunod na uri ng kontrol:

1) katatagan ng sensitized erythrocytes (erythrocytes + 1% solusyon ng normal na serum ng kuneho);

2) pagkakumpleto ng hemagglutinin depletion sa bawat test serum (test serum sa pinakamababang dilution + formalinized erythrocytes);

3) ang kawastuhan ng pagtukoy ng minimum na neutralizing dosis ng antigen (2, 1 at 0.5 neutralizing dosis ng antigen + antibody erythrocyte diagnosticum).

Ang reverse indirect hemagglutination (ronga) reaction ay ginagamit upang ipahiwatig ang bacterial at viral antigens sa mga test materials, gayundin para sa mabilis na pagsusuri ng ilang mga impeksiyon.

Hindi tulad ng RNGA, sa reaksyong ito, ang mga pulang selula ng dugo ay na-sensitize hindi sa pamamagitan ng antigen, ngunit sa pamamagitan ng mga antibodies, ang agglutination na nangyayari kapag ang antigen ay idinagdag.

Ang mga pulang selula ng dugo ay pre-fixed na may formaldehyde o glutaraldehyde at pagkatapos ay nakatali sa gamma globulin, na nakahiwalay sa immune sera at nililinis mula sa iba pang serum na protina. Ang pagbubuklod ng gamma globulin sa ibabaw ng mga pulang selula ng dugo ay nangyayari sa tulong ng chromium chloride. Upang gawin ito, magdagdag ng 1 dami ng immunoglobulin na nakahiwalay sa immune serum, 1 dami ng 50% na suspensyon ng formalinized erythrocytes at 1 volume ng 0.1-0.2% chromium chloride solution sa 8 volume ng distilled water. Ang halo ay naiwan sa loob ng 10-15 minuto sa temperatura ng silid, pagkatapos ay ang mga pulang selula ng dugo ay ginagamot tulad ng sa passive hemagglutination reaction.

Ang pagtitiyak ng antibody diagnosticum ay nasuri sa reaksyon ng pagsugpo ng passive hemagglutination ng isang homologous antigen. Ang reaksyon ay dapat na inhibited ng isang homologous antigen ng hindi bababa sa 16 na beses at hindi inhibited ng isang heterologous. Ang isang kontrol ay ginagamit upang matiyak ang kawalan ng kusang hemagglutination.

Gamit ang reaksyong ito, ang mga pathogen ay ipinahiwatig sa materyal na kinuha mula sa mga organo ng mga patay na tao at hayop, halimbawa, mula sa utak, pali, at atay ng mga baga. Maghanda ng 10% na suspensyon ng mga organ na ito sa isang isotonic sodium chloride solution, i-centrifuge ang mga ito sa loob ng 30-60 minuto sa 10,000 rpm at gamitin ang supernatant bilang antigen.

Pamamaraan. Maghanda ng 2-tiklop na dilution ng test material (antigen) sa isang stabilizing solution. Magdagdag ng 1 patak ng bawat antigen dilution sa 3 katabing balon ng micropanel (ang reaksyon ay sumasakop sa 3 magkatulad na hanay ng mga balon). Magdagdag ng 1 patak ng stabilizing solution sa bawat balon ng unang hilera, 1 patak ng homologous immune serum na diluted 1:10 sa mga balon ng pangalawang hilera, 1 patak ng heterologous immune serum sa ikatlong hilera. Ang pangalawa at pangatlong hanay ay nagsisilbing mga kontrol para sa pagtitiyak ng reaksyon. Ang halo ay naiwan sa loob ng 20 minuto sa temperatura ng kuwarto.

Magdagdag ng 1 patak ng 1% na suspensyon ng sensitized erythrocytes (erythrocyte antibody diagnosticum) sa lahat ng mga balon at iling ang mga plato nang lubusan. Ang mga resulta ng reaksyon ay isinasaalang-alang pagkatapos ng 30-40 minuto. Sa pagkakaroon ng isang tiyak na antigen, ang hemagglutination ay sinusunod sa una at ikatlong hilera (na may heterologous serum) at wala sa pangalawang hilera, kung saan ang antigen ay dati nang neutralisado sa homologous serum.

Ang reaksyon ay sinamahan ng mga kontrol ng sensitized erythrocytes para sa spontaneous agglutination.

Reverse indirect hemagglutination inhibition reaction (RTONGA) nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang pagkakaroon ng mga antibodies sa sera ng mga tao at hayop.

Pamamaraan. Ang sera ay natunaw ng 10 beses na may isotonic sodium chloride solution, pinainit ng 20 minuto sa temperatura na 65 ° C upang sirain ang mga nonspecific na inhibitor, at pagkatapos ay ang 2-fold dilution ng sera ay inihanda sa isang stabilizing solution at isang gumaganang dosis ng antigen na naglalaman ng 4 na agglutinating unit. Magdagdag ng 1 patak ng bawat pagbabanto ng suwero sa mga balon ng micropanel at magdagdag ng 1 patak ng antigen sa kanila, ang pagbabanto nito ay tumutugma sa gumaganang dosis. Pagkatapos makipag-ugnay sa mga bahagi ng pinaghalong para sa 20 minuto sa temperatura ng silid, magdagdag ng 1 patak ng erythrocyte antibody diagnosticum sa lahat ng mga balon at iling nang husto. Pagkatapos ng 1.5-2 na oras ng pagpapapisa ng itlog sa temperatura ng silid, ang mga resulta ng reaksyon ay isinasaalang-alang para sa hemagglutination. Ang serum titer ay ang pinakamataas na pagbabanto nito, na ganap na pumipigil sa reaksyon ng hemagglutination na may apat na agglutinating antigen units.

Ang reaksyon ay sinamahan ng mga kontrol ng sensitized erythrocytes para sa spontaneous agglutination sa pagkakaroon ng: a) isang stabilizing solution; b) normal na antigen (mula sa materyal na hindi naglalaman ng virus); c) pagsubok ng suwero. Ang bentahe ng reaksyon ay ang versatility nito at ang kakayahang gamitin ito upang makita ang iba't ibang antigens.

Pagsusuri ng mga resulta ng hemagglutination. Ang mga resulta ng RNGA, RONGA at RTONGA ay isinasaalang-alang ayon sa antas ng erythrocyte agglutination: (++++) - kumpletong agglutination; (+++) – hindi gaanong kumpletong agglutination; (++) – bahagyang agglutination; (+) - mga bakas ng aglutinasyon; (–) – kawalan ng aglutinasyon.

Ang reaksyon ay itinuturing na positibo kung ang agglutination ay kumpleto (++++) o halos kumpleto (+++), ang diagnosticum ay hindi nagbibigay ng kusang pagsasama-sama sa pagkakaroon ng bawat bahagi ng reaksyon, at ang kontrol ng pagtitiyak ng positibo ang antigen o antibody.

Home → Pagsusuri → Immunological method → Mga reaksyon ng hematglutination (immunological method)

Mga reaksyon ng aglutinasyon ay batay sa pakikipag-ugnayan ng isang reagent (antibodies) sa mga antigen na matatagpuan sa ibabaw ng mga selula o mga dayuhang particle. Bilang isang resulta, ang malalaking aggregate ay nabuo, na namuo at makikita kahit sa mata. Sa ganitong paraan, ang pangkat ng dugo ay tinutukoy ayon sa sistema ng ABO, ang pagkakaroon ng Rh factor sa loob nito, atbp. Ito ay isang mas sensitibong pamamaraan ng diagnostic kumpara sa mga reaksyon ng pag-ulan, dahil ang dami ng sediment (agglutinate) ay lumampas sa dami ng namuo.

Direktang hematglutination

Ang direktang hemagglutination reaction (DHR) ay ginagamit upang makita ang mga antigen sa ibabaw ng mga microorganism at pulang selula ng dugo, pati na rin ang mga antibodies sa kanila.
Ang materyal ng pagsubok (dugo) ay idinagdag sa karaniwang sera na naglalaman ng mga antibodies. Ang bilis ng direktang reaksyon ng agglutination ay nauugnay sa dami ng materyal na sinusuri, ang dami at konsentrasyon ng suwero, at temperatura ng kapaligiran.

Hindi direktang hemagglutination

Ang hindi direktang reaksyon ng hemagglutination ay isinasagawa upang makita ang mga antibodies sa dugo ng pasyente gamit ang isang erythrocyte diagnosticum. Ang reagent ay binubuo ng mga pulang selula ng dugo sa ibabaw kung saan mayroong isang antigen (mga protina ng mga microorganism, toxins, allergens, atbp.).
Ang serum ng dugo ng pasyente ay diluted na may 0.9% sodium chloride solution, pagkatapos ay idinagdag ang erythrocyte diagnosticum at ang resulta ay sinusubaybayan. Ang napakasensitibong pamamaraang diagnostic na ito ay nakakakita ng mga antigen kahit sa maliliit na konsentrasyon.

Hemagglutination reaction (HRA).

Sa laboratoryo, dalawang reaksyon ng hemagglutination na may magkakaibang mekanismo ng pagkilos ang ginagamit.

Ang unang RGA ay serological. Sa reaksyong ito, ang mga pulang selula ng dugo ay pinagsama-sama kapag nakikipag-ugnayan sa naaangkop na mga antibodies (hemagglutinins). Ang reaksyon ay malawakang ginagamit upang matukoy ang mga pangkat ng dugo.

Ang pangalawang RGA ay hindi serological. Sa loob nito, ang pagdirikit ng mga pulang selula ng dugo ay hindi sanhi ng

antibodies, ngunit mga espesyal na sangkap na nabuo ng mga virus. Halimbawa, pinagsasama-sama ng influenza virus ang mga pulang selula ng dugo ng mga manok at guinea pig, at ang virus ng polio ay nagsasama-sama ng mga pulang selula ng dugo ng mga tupa. Ginagawang posible ng reaksyong ito na hatulan ang pagkakaroon ng isang partikular na virus sa materyal na pinag-aaralan.

Ang reaksyon ay isinasagawa sa mga test tube o sa mga espesyal na plato na may mga balon. Ang materyal na nasubok para sa pagkakaroon ng virus ay diluted na may isotonic solution mula 1:10 hanggang 1:1280; Ang 0.5 ml ng bawat pagbabanto ay halo-halong may pantay na dami ng 1-2% red blood cell suspension. Sa kontrol, ang 0.5 ml ng erythrocytes ay halo-halong may 0.5 ml ng isotonic solution. Ang mga test tube ay inilalagay sa isang termostat sa loob ng 30 minuto, at ang mga plato ay iniiwan sa temperatura ng silid sa loob ng 45 minuto.

Accounting para sa mga resulta. Kung positibo ang reaksyon, lumilitaw ang isang sediment ng mga pulang selula ng dugo na may scalloped na mga gilid (“payong”) sa ilalim ng test tube o balon, na sumasakop sa buong ilalim ng balon. Kung negatibo ang resulta, ang mga pulang selula ng dugo ay bumubuo ng isang siksik na sediment na may makinis na mga gilid ("button"). Ang parehong sediment ay dapat na nasa kontrol. Ang intensity ng reaksyon ay ipinahayag ng "+" na mga palatandaan.

Hemagglutination reaksyon

Ang titer ng virus ay ang pinakamataas na pagbabanto ng materyal kung saan nangyayari ang aglutinasyon.

Hemagglutination inhibition reaction

Ito ay isang serological reaksyon kung saan ang mga tiyak na antiviral antibodies, na nakikipag-ugnayan sa virus (antigen), neutralisahin ito at inaalis ito ng kakayahang pagsamahin ang mga pulang selula ng dugo, ibig sabihin, pagbawalan ang reaksyon ng hemagglutination. Ang reaksyong ito ay nagpapahintulot sa iyo na matukoy ang uri at uri ng mga virus.

Pag-set up ng isang reaksyon. Ang 0.25 ml ng antiviral serum ay halo-halong may pantay na dami ng materyal na naglalaman ng virus. Ang halo ay inalog at inilagay sa isang termostat sa loob ng 30 minuto, pagkatapos ay idinagdag ang 0.5 ml ng 1-2% na suspensyon ng red blood cell.

Accounting para sa mga resulta. Kung ang eksperimento ay natupad nang tama, ang isang "button" ay dapat mabuo sa kontrol ng serum at erythrocytes - walang kadahilanan na agglutinating erythrocytes; sa kontrol ng antigen, isang "payong" ang nabuo - ang virus ay nagdulot ng aglutinasyon ng mga pulang selula ng dugo. Kung ang serum ay homologous sa virus na pinag-aaralan, isang "button" ang nabuo - ang serum ay na-neutralize ang virus.

Hindi direktang reaksyon ng hemagglutination

Ang indirect (passive) hemagglutination reaction (RIHA) ay batay sa katotohanan na ang mga pulang selula ng dugo, kung ang isang natutunaw na antigen ay na-adsorbed sa kanilang ibabaw, ay nakakakuha ng kakayahang mag-aglutinate kapag nakikipag-ugnayan sa mga antibodies sa adsorbed antigen.

Pag-set up ng isang reaksyon. Ang serum ay pinainit sa loob ng 30 minuto sa 56 °C, diluted nang sunud-sunod sa isang ratio na 1:10 - 1:1280 at ibinuhos sa 0.25 ml sa mga test tube o mga balon, kung saan ang 2 patak ng mga pulang selula ng dugo na may mga antigen na naka-adsorb sa mga ito ay pagkatapos. idinagdag.

Mga kontrol: isang suspensyon ng mga erythrocytes na may mga antigens na naka-adsorbed sa kanila na may malinaw na immune serum, isang suspensyon ng mga erythrocytes na may mga antigen na na-adsorbed sa kanila na may normal na serum; isang suspensyon ng mga normal na pulang selula ng dugo na may test serum. Sa unang kontrol, dapat mangyari ang agglutination, sa pangalawa at pangatlo hindi ito dapat mangyari.

Kontrolin ang mga tanong.

1. Ano ang ipinahihiwatig ng isang positibong resulta ng pagsusuri sa X-ray sa pagitan ng mga pulang selula ng dugo at ng materyal na sinusuri para sa pagkakaroon ng virus?

2. Magkakaroon ba ng agglutination reaction ng mga pulang selula ng dugo kung ang isang virus at ang kaukulang serum nito ay idinagdag sa kanila? Ano ang pangalan ng reaksyon na nagpapakita ng hindi pangkaraniwang bagay na ito?

PRAKTIKAL NA GAWAIN Blg. 12.

Makadagdag sa reaksyon ng fixation.

Ang complement fixation reaction (FFR) ay nakabatay sa katotohanan na ang isang partikular na antigen-antibody complex ay laging nag-adsorb (nagbibigkis) ng complement sa sarili nito.

Ang reaksyong ito ay malawakang ginagamit sa pagtukoy ng mga antigen at serodiagnosis ng mga impeksiyon, lalo na ang mga sakit na dulot ng spirochetes (Wassermann reaction), rickettsia at mga virus.

Ang RKS ay isang komplikadong serological reaction. Ito ay nagsasangkot ng pandagdag at dalawang antigen-antibody system. Mahalaga, ang mga ito ay dalawang serological reaksyon.

Ang tamang pangunahing sistema ay binubuo ng isang antigen at isang antibody (kilala ang isa, ang isa ay hindi). Ang isang tiyak na halaga ng pandagdag ay idinagdag dito. Kung magkatugma ang antigen at antibody ng system na ito, magkokonekta sila at magbibigkis ng papuri. Ang resultang kumplikado ay pinong dispersed at hindi nakikita.

Ang pagbuo ng complex na ito ay nakita gamit ang pangalawang hemolytic o indicator system. Kabilang dito ang mga pulang selula ng dugo ng tupa (antigen) at ang kaukulang hemolytic serum (antibody), i.e. yari na immune complex. Sa sistemang ito, ang lysis ng mga pulang selula ng dugo ay maaari lamang mangyari sa pagkakaroon ng pandagdag. Kung ang pandagdag ay nakatali sa unang sistema, pagkatapos ay sa pangalawang sistema ay walang hemolysis, dahil walang libreng pandagdag. Ang kawalan ng hemolysis (ang mga nilalaman ng tubo ay maulap o may sediment ng mga erythrocytes sa ibaba) ay naitala bilang isang positibong resulta ng RSC.

Kung sa unang sistema ang antigen ay hindi tumutugma sa antibody, kung gayon ang immune complex ay hindi bubuo at ang pandagdag ay mananatiling libre. Nananatiling libre, ang papuri ay nakikilahok sa pangalawang sistema, na nagiging sanhi ng hemolysis, ang resulta ng RSC ay negatibo (ang mga nilalaman ng mga tubo ay transparent - "lacquered blood").

Mga bahagi, umakma sa mga reaksyon ng pag-aayos:

1. Antigen - karaniwang lysate, extract, hapten,

mas madalas na isang suspensyon ng mga microorganism.

2. Antibody - suwero ng pasyente.

3. Complement - guinea pig serum.

4. Antigen - mga erythrocytes ng tupa.

5. Antibody - hemolysin sa mga erythrocytes ng tupa.

6. Isotonic solution.

Dahil sa ang katunayan na ang isang malaking bilang ng mga kumplikadong sangkap ay kasangkot sa RSC,

dapat muna silang ma-titrate at dalhin sa reaksyon sa eksaktong dami at sa pantay na dami: 0.5 o 0.25, mas madalas na 0.2, 1.25 o 1.0 ml (ang mas malalaking volume ay nagbibigay ng mas tumpak na resulta). Ang titration ng mga bahagi ng reaksyon ay isinasagawa sa parehong dami ng eksperimento, na pinapalitan ang mga nawawalang sangkap ng isotonic solution.

Kaugnay na impormasyon:

Maghanap sa site:

Ang indirect o passive hemagglutination test (IRHA o RPHA) ay mas sensitibo at partikular kaysa sa agglutination test. Ang reaksyong ito ay ginagamit din sa dalawang direksyon.

1) Upang makita ang mga antibodies sa serum ng dugo ng pasyente, ginagamit ang mga diagnostic ng erythrocyte, kung saan ang antigen ay na-adsorbed sa ibabaw ng mga erythrocyte na ginagamot ng tannin. Kaugnay ng reaksyong ito, mas madalas na ginagamit ang terminong RPGA.

Ang test serum ay diluted sa mga balon ng mga plastic plate at idinagdag ang erythrocyte diagnosticum. Sa isang positibong reaksyon, lumilitaw ang isang manipis na pelikula sa kahabaan ng mga dingding ng butas sa anyo ng isang "lace umbrella"; na may negatibong reaksyon, lumilitaw ang isang siksik na sediment ng mga erythrocytes sa anyo ng isang "button".

2) Upang makita ang mga toxin at bacterial antigens sa materyal na pinag-aaralan, ginagamit ang mga diagnostic ng antibody erythrocyte, na nakuha sa pamamagitan ng adsorption ng mga antibodies sa erythrocytes. Kaugnay ng reaksyong ito, mas madalas na ginagamit ang terminong RNGA. Halimbawa, sa tulong ng antibody diagnostics, ang salot na bacillus antigen, diphtheria exotoxin, at botulinum exotoxin ay nakita.

Ano ang isang erythrocyte diagnosticum? Ano ang isang antibody erythrocyte diagnosticum?

Ang mga erythrocyte diagnosticum ay mga pulang selula ng dugo (ginagamot sa tannin o formalin) na may mga antigen na nakuha mula sa bakterya na na-adsorb sa mga ito, at ginagamit sa RPHA (passive hemagglutination reactions). Sa kaso kapag ang RPGA ay ginagamit upang makita ang antigen sa mga pagtatago ng mga pasyente, sa mga tisyu, atbp., ang "antibody diagnosticums" ay ginagamit, ibig sabihin, ang mga pulang selula ng dugo ay na-sensitize sa mga antibodies.

Sa RNGA, ang mga serum antibodies ng dugo ay natukoy gamit ang isang antigenic erythrocyte diagnosticum, na mga erythrocytes na may mga antigen na naka-adsorbed sa kanila.

Pamamaraan para sa pag-set up ng mga reaksyon. Reaksyon ng coagglutination.

- pag-aayos ng mga pulang selula ng dugo na may formaldehyde o glutaric o acrylic aldehydes. Ang mga naturang ginagamot na pulang selula ng dugo ay nakaimbak nang mahabang panahon. Mas madalas, ang mga erythrocytes mula sa tupa, tao, manok, atbp ay ginagamit para sa layuning ito;
— paggamot ng mga nakapirming erythrocytes na may solusyon sa tannin. Bilang isang resulta, ang mga pulang selula ng dugo ay nakakakuha ng kakayahang irreversibly adsorb protina (mga virus at antibodies) sa kanilang ibabaw;
- sensitization ng tanized erythrocytes sa pamamagitan ng mga virus o antibodies.

Coagglutination reaction (CAR)

Ang reaksyon ng coagglutination ay ginagamit upang matukoy ang mga antigen gamit ang mga antibodies na naka-adsorb sa protina A ng mga staphylococcal cells (antibody diagnosticum).
Ang Protein A ay may kaugnayan sa Fc fragment ng mga immunoglobulin, samakatuwid ang naturang bacteria na ginagamot ng immune diagnostic serum na hindi partikular na nag-adsorb ng serum antibodies, na pagkatapos ay nakikipag-ugnayan sa mga aktibong sentro na may kaukulang microbes na nakahiwalay sa mga pasyente. Bilang resulta ng coagglutination, ang mga natuklap ay nabuo na binubuo ng staphylococci, diagnostic serum antibodies at ang nakitang microbe.

Agglutinating serums: kung ano ang nilalaman nito; paano sila nakukuha, para saan ang mga ito ginagamit; Ano ang titer ng agglutinating serum?

Ang aglutinating serum ay nakuha sa pamamagitan ng pagbabakuna ng mga kuneho (intravenously, subcutaneously o intraperitoneally) na may suspensyon ng mga napatay na bakterya, na nagsisimula sa isang dosis na 200 milyon, pagkatapos ay 500 milyon, 1 bilyon, 2 bilyong microbial na katawan sa 1 ml, sa pagitan ng 5 araw. 7-8 araw pagkatapos ng huling pagbabakuna, kukuha ng dugo at tinutukoy ang titer ng antibody.

Ang titer ng isang agglutinating serum ay ang pinakamataas na dilution ng serum kung saan nangyayari ang agglutination sa kaukulang microorganism.

Ang agglutinating sera ay ginagamit upang makilala ang mga mikrobyo sa isang buong-scale na reaksyon ng agglutination.

Hemagglutination reaction (HRA)

Kung ang microorganism na pinag-aaralan ay pinagsasama-sama ng serum sa titer o sa kalahati ng halaga ng titer, maaari itong ituring na kabilang sa mga species na ang pangalan ay ipinahiwatig sa label ng ampoule.

Ano ang mga pagkakaiba sa pagitan ng polyvalent at monovalent (monoreceptor) agglutinating sera; Bakit ang pagbabakuna ng isang kuneho na may microbes ng isang uri ay gumagawa ng serum na naglalaman ng mga antibodies sa ilang antigens?

Ang Monoreceptor sera ay sera na naglalaman ng mga antibodies sa isang antigen lamang, at polyvalent sera na nagbibigay ng mga reaksiyong aglutinasyon sa dalawa o tatlong magkakaugnay na bakterya na may isang karaniwang antigen. Ang aglutinating sera ay ginagamit upang makilala ang mga microorganism sa isang agglutination reaction. Ang kawalan ng naturang sera ay kaya nilang magbigay ng mga reaksyon ng agglutination ng grupo, dahil naglalaman sila ng mga antibodies sa bakterya na may mga karaniwang antigens.

Hemagglutination reaksyon. Paglalarawan at Aplikasyon

Ito ay batay sa katotohanan na ang mga pulang selula ng dugo, kung saan ang mga antigen ay dating adsorbed, ay nakakakuha ng kakayahang mag-aglutinate sa pagkakaroon ng homologous sera (antibodies).

Sa kasong ito, ang mga pulang selula ng dugo ay kumikilos bilang mga carrier na may mga tiyak na determinant, ang agglutination na nangyayari bilang isang resulta ng reaksyon ng antigen + antibody.

Ang mga pulang selula ng dugo sa ibabaw kung saan ang mga antigen ay mahigpit na nakakabit ay tinatawag na erythrocyte antigen diagnosticum, o mga erythrocyte na sensitized sa antigen.

Ang isa pang uri ng RNGA - ang mga antibodies ay na-adsorbed sa ibabaw ng mga erythrocytes at ang kanilang kasunod na agglutination ay nangyayari sa pagkakaroon ng isang homologous antigen. Sa kasong ito, ang mga naturang erythrocyte ay tinatawag na erythrocyte antibody diagnosticum, o mga erythrocyte na na-sensitize ng mga antibodies.

Batay sa dalawang pangunahing pamamaraang pamamaraang ito, maraming pagbabago ng RNGA ang binuo at ginamit. Kaya, ang mga maliliit na karaniwang latex na particle ay ginagamit bilang mga carrier. Sa kasong ito, ang reaksyon ay tinatawag na latex agglutination reaction (RLA) o Staphylococcus aureus ay ginagamit - coagglutination reaction, atbp Karaniwan, ang mga diagnostic ng erythrocyte ay inihanda sa mga negosyo ng biological na industriya, at ang pangunahing karanasan ng RNGA ay isinasagawa sa mga diagnostic laboratories.

Ang paghahanda ng erythrocyte diagnosticum ay kinabibilangan ng mga sumusunod na hakbang:

• pag-aayos ng mga pulang selula ng dugo na may formaldehyde o glutaric o acrylic aldehydes. Ang mga naturang ginagamot na pulang selula ng dugo ay nakaimbak nang mahabang panahon. Mas madalas, ang mga erythrocytes mula sa tupa, tao, manok, atbp ay ginagamit para sa layuning ito;
• paggamot ng mga nakapirming erythrocytes na may solusyon sa tannin. Bilang isang resulta, ang mga pulang selula ng dugo ay nakakakuha ng kakayahang irreversibly adsorb protina (mga virus at antibodies) sa kanilang ibabaw;
• sensitization ng tanized erythrocytes sa pamamagitan ng mga virus o antibodies.

Dapat tandaan na ang mga pamamaraan para sa paghahanda ng mga diagnostic ng erythrocyte para sa mga impeksyon sa viral ay iba.

Ang pamamaraan para sa pagsasagawa ng RNGA upang matukoy at matukoy ang titer ng antibody ay ang mga sumusunod:

• pantay na dosis ng mga erythrocytes na na-sensitize sa antigen ay idinagdag sa sunud-sunod na 2-tiklop na dilution ng serum;
• ang timpla ay naiwan sa loob ng 2-3 oras sa temperatura ng silid o para sa 16-18 na oras sa 4 °C;
• isaalang-alang ang mga resulta. Kung ang serum ay naglalaman ng mga antibodies sa virus kung saan ang mga pulang selula ng dugo ay naging sensitibo, ang hemagglutination ay sinusunod, na sinusuri sa mga krus.

Ang titer ng antibody sa serum ay itinuturing na pinakamataas na serum dilution na nagbibigay pa rin ng hemagglutination ng hindi bababa sa dalawang krus.

Ang RNGA ay sinamahan ng lahat ng nauugnay na kontrol. Karaniwan ang reaksyon ay isinasagawa gamit ang micromethod.

Binibigyang-daan ka ng RNGA na lutasin ang mga sumusunod na problema sa diagnostic:

• tuklasin ang mga antibodies at matukoy ang kanilang titer sa serum ng dugo gamit ang isang kilalang erythrocyte antigen diagnosticum;
• tuklasin at kilalanin ang isang hindi kilalang virus gamit ang isang kilalang erythrocyte antibody diagnostic.

Mga kalamangan ng RNGA: mataas na sensitivity, pagiging simple ng diskarte sa paglalagay at bilis ng pagtugon. Gayunpaman, mahalagang tandaan na ang mga malalaking kahirapan ay lumitaw sa paghahanda ng matatag na mga diagnostic ng erythrocyte (mahusay na pagtitiwala sa kadalisayan ng mga sangkap na ginamit, ang pangangailangan na pumili ng isang paraan ng pag-aayos, tanization at sensitization ng mga erythrocytes para sa bawat uri ng virus).

Kung makakita ka ng error, mangyaring pumili ng isang piraso ng teksto at pindutin ang Ctrl+Enter.

Sa pakikipag-ugnayan sa

Indirect hemagglutination reaction (IRHA)

Ang paggamit ng mga sorbed diagnostic na gamot ay batay sa prinsipyo ng immunological na pagkilala sa mga istruktura sa ibabaw, na patuloy na natanto sa kalikasan. Mula sa puntong ito, walang mga pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng paggamit ng, halimbawa, isang microbial cell o isang artipisyal na carrier na puno ng antigen (antibodies). Ang iba't ibang mga carrier ay ginagamit bilang batayan para sa mga sorbed na paghahanda - microbial cells, erythrocytes, latex, bentonin, cholesterol, Sephadex, dermatol, activated carbon, fungal spores, atbp.

Matapos ang gawain ng A.T. Kravchenko (1945), ang mga erythrocyte na nawalan ng kakayahang mabuhay at naayos na may iba't ibang mga kemikal na reagents ay naging pinakalaganap bilang isang carrier ng antigens o antibodies. Batay sa prinsipyo ng paggamit ng mga erythrocytes (parehong native at fixed) bilang isang antigen carrier, ang hindi direktang (passive) na reaksyon ng hemagglutination ay naging laganap.

Ang panukala na gamitin ang indirect hemagglutination reaction (IRHA) para sa mga layuning diagnostic ay lumitaw batay sa dati nang binuo na kaalaman tungkol sa mataas na aktibidad ng sorption ng erythrocytes. Kung ikukumpara sa maraming iba pang mga carrier ng antigens at antibodies, ang mga erythrocytes ay may ilang mga pakinabang sa hindi direktang reaksyon ng hemagglutination. Una, sa isotonic na mga solusyon sa asin ay bumubuo sila ng isang medyo matatag na pagdirikit at hindi tumira sa maikling panahon. Pangalawa, ang mga pulang selula ng dugo ng parehong species ng hayop ay magkapareho sa laki. At sa wakas, ito ay medyo madali para sa mga erythrocytes na ilakip ang iba't ibang serologically active component nang direkta o bilang isang resulta ng espesyal na pagproseso.

Ang paglikha ng mga diagnostic ng erythrocyte mula sa mga nagpapatatag na erythrocytes ay ginagawang posible na malampasan ang mga paghihirap na lumitaw kapag gumagamit ng mga katutubong erythrocytes.

Kapag nag-aaral ng mga erythrocytes na ginagamot sa iba't ibang mga sangkap ng pag-aayos, ang ilan sa kanilang mga karaniwang katangian ay itinatag:

Sa mga tuntunin ng morpolohiya, halos hindi sila naiiba sa mga sariwa;

Huwag mag-hemolyze sa mga hipotonik na solusyon, sa tubig at pagkatapos ng pagyeyelo-pagtunaw;

Maaaring i-freeze tuyo;

Ang kanilang mga istraktura sa ibabaw ay nagpapanatili ng kakayahang mabago ng kemikal (halimbawa, tannin, diazo compound) at tumutugon sa mga antigen at antibodies.

Ang pangunahing criterion para sa kalidad ng mga fixed erythrocytes ay ang posibilidad na gamitin ang mga ito upang makakuha ng mga sensitized na gamot sa kawalan ng nonspecific na gluing sa stabilizing liquids.

Ang paghahanda ng ibabaw ng mga erythrocytes upang madagdagan ang kapasidad ng sorption para sa mga antigens ay mahalaga sa disenyo ng mga diagnostic na gamot. Ang paggamot sa mga pulang selula ng dugo na may tannin ay naging lalong laganap.

Sa ilalim ng impluwensya nito, ang mga antigenic na katangian ng erythrocytes (permeability, sedimentation rate) ay nagbabago, at ang kanilang paglaban sa hemolytic effect ng ilang mga fatty acid ay tumataas. Gayunpaman, ang pangunahing bagay ay nakamit - ang mga tanized erythrocytes ay may mas malaking kapasidad ng pagsipsip ng mga protina, na kasalukuyang malawakang ginagamit sa paggawa ng mataas na kalidad na antigen at antibody diagnostics.

Kasama ng mga tanning erythrocytes, ang mga kemikal na reagents tulad ng bromelain, tryopsin, potassium periodate, na nagbabago rin sa mga erythrocyte membrane, ay ginagamit upang makagawa ng mga erythrocyte diagnosticum at maghanda ng mga carrier ng antigen.

Matapos ihanda ang ibabaw ng mga erythrocytes, ang pinakamahalagang proseso ay nangyayari - ang proseso ng hemosensitization - ang huling yugto ng paggawa ng erythrocyte diagnosticums.

Upang palakasin ang koneksyon sa pagitan ng carrier at antigen, ginagamit ang iba't ibang mga conjugating substance - bisdiazobenzidine, difluorodinitrobenzine, cyanogen chloride, cadmium chloride at acetate, bromine chloride, formaldehyde, glutaraldehyde, cyanogen bromide, rivanol, amidol, atbp.

Ang paggamit ng mga conjugating substance ay tumutulong upang maalis ang mga disadvantages na tanized erythrocytes, na ginagamit para sa sensitization nang walang conjugating substance, mayroon.

Ang pinakamalawak na ginagamit na conjugating substance ay chromium chloride, glutaraldehyde, black diazol C, at amidol. Ang proseso ng sensitization na may chromium chloride ay nangyayari nang napakabilis - mula 4 hanggang 10 minuto, na umaakit sa atensyon ng mga mananaliksik. Sa kasong ito, ginagamit ang mga konsentrasyon ng chromium chloride mula 0.05 hanggang 2%, ang pH ay hindi mas mababa sa 5.0 sa temperatura ng halo ng reaksyon na 20-250 C. Sa proseso ng sensitization na may chromium chloride, ang mga carboxyl group ng erythrocyte membrane proteins ay isinaaktibo. . Bilang resulta, nabuo ang isang covalent bond sa pagitan ng lamad ng pulang selula ng dugo at sensitin.

Ang hindi direktang reaksyon ng hemagglutination ay lubos na tiyak, dahil ang pagdirikit ng mga erythrocytes ay nangyayari bilang isang resulta ng pakikipag-ugnayan ng antigen sa mga antibodies na na-adsorbed sa mga erythrocytes. Ang natatanging tampok nito ay ang mataas na sensitivity nito: nakakakita ito ng 0.02-0.05 μg ng antibody protein. Sa mga tuntunin ng pagiging sensitibo, ito ay higit na nakahihigit sa mga reaksyon ng immunodiffusion, immunofluorescence, radial immunodiffusion, complement fixation, at neutralization. Ang RNGA ay hindi gaanong sensitibo kaysa sa mga pamamaraan ng radioimmunoelectrophoresis, pagtukoy ng dami ng protina ng radioactive antibodies sa isang immunosorbent, at enzyme immunoassay.

Kasama sa mga bentahe ng RNGA ang medyo mataas na reproducibility, kadalian ng pagpapatupad, at ang pangangailangan para sa kaunting dami ng mga sangkap, lalo na kapag gumagamit ng micromethod.

Sa mga nakalipas na taon, malawak na ginagamit ang RNGA sa pagsusuri ng nakakahawang rhinotracheitis, pagtatae, impeksyon sa adenovirus, impeksyon sa rota at coronavirus, parainfluenza 3 at impeksyon sa respiratory syncytial.

Nagbibigay kami ng halimbawa ng paggawa at paggamit ng erythrocyte diagnosticum para sa pag-detect ng mga antibodies sa rota at mga impeksyon sa coronavirus.

Ang paraan para sa paghahanda ng mga diagnostic ng antibody para sa pagtukoy ng mga rota at coronavirus antigens sa RNGA ay ang mga sumusunod: pagkuha ng suspensyon ng mga erythrocytes; pag-aayos ng kanilang mga acroleins; tanization, na nagpapahintulot sa pagkuha ng matatag na pagsipsip ng kinakailangang protina sa mga pulang selula ng dugo; sensitization ng tanized erythrocytes na may immunoglobulins; pagpapasiya ng pagtitiyak ng inihandang diagnosticum. Ang paghahanda ng isang suspensyon ng mga erythrocytes ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagkolekta ng dugo ng isang klinikal na malusog na tupa sa isang prasko na may mga kuwintas na salamin. Pagkatapos ng defibrinating ng dugo, ang mga pulang selula ng dugo ay dapat hugasan ng 3-5 beses na may isotonic (0.9%) na solusyon ng sodium chloride sa pamamagitan ng sentripugasyon sa loob ng 15-20 minuto sa 400 g.

Upang patatagin ang mga pulang selula ng dugo, ginagamot sila ng acrolein. Tulad ng nalalaman, ang epekto nito ay medyo mas banayad kaysa sa formaldehyde, at tinitiyak ang katatagan at mas mataas na aktibidad ng mga pulang selula ng dugo. Upang gawin ito, ang pantay na dami ng isang 10% na suspensyon ng mga erythrocytes ay halo-halong may 0.2% na solusyon ng acrolein na inihanda sa phosphate buffer solution (PBS) na may pH 7.2. Ang resultang suspensyon ay pinananatili sa loob ng 30 minuto sa 37°C, hinahalo nang lubusan, na sinusundan ng pag-alis ng acrolein sa pamamagitan ng paulit-ulit na sentripugasyon sa loob ng 5 minuto sa 600-800g hanggang sa ganap na mawala ang partikular na amoy. Ang bentahe ng mga pulang selula ng dugo na inihanda sa ganitong paraan ay ang mga ito ay nakaimbak para magamit sa hinaharap at maaaring maimbak nang mahabang panahon nang hindi sumasailalim sa hemolysis.

Kasunod nito, ang mga nagpapatatag na pulang selula ng dugo sa isang 10% na konsentrasyon ay pinananatili sa 2-4 °C sa PBS na may pH na 7.2 sa loob ng dalawang buwan.

Upang madagdagan ang kapasidad ng sorption at sedimentation ng mga pulang selula ng dugo, kinakailangan na i-tannize ang mga ito sa pamamagitan ng paghahalo ng pantay na bahagi ng isang 10% na suspensyon ng mga hugasan na pulang selula ng dugo at isang solusyon ng tannin sa PBS at pH 7.2 sa isang dilution na 1:30,000. Ang timpla ay lubusan na halo-halong at pinananatili sa 370 C sa loob ng 15 minuto, pagkatapos nito ang mga pulang selula ng dugo ay lubusang hugasan mula sa tannin nang dalawang beses sa PBS na may pH na 7.2 at tatlong beses na may isotonic sodium chloride solution na may pH na 7.2-7.4.

Ang pinakamainam na panahon para sa paggarantiya ng pagtanggap ng mataas na kalidad na erythrocyte diagnosticum ay ang kanilang sensitization sa loob ng 24-48 na oras pagkatapos ng kanilang paggamot na may tannin.

Sa proseso ng pagmamanupaktura ng diagnosticums, 0.3% phenolysed isotonic sodium chloride solution na may 0.1% normal na rabbit o horse serum, na dating inactivated sa 56°C sa loob ng 30 minuto at na-adsorbed ng normal na sheep erythrocytes, ay ginagamit bilang solvent at preservative.37°C. sa loob ng 30 minuto.

Ang sensitization ng tanized erythrocytes ay dapat isagawa gamit ang hyperimmune serum, ayon sa pagkakabanggit, laban sa rota at bovine coronaviruses (na ginawa sa All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine na pinangalanang Y.R. Kovalenko). Sa kasong ito, ang sensitizing dose (konsentrasyon ng protina) ng anti-rotavirus immune serum ay 280 μg/ml, at ang immune serum sa coronavirus ay 260 μg/ml.

Isinasagawa ang sensitization sa pamamagitan ng paghahalo ng pantay na dami ng tanned erythrocytes at immune serum na pinainit nang 30 minuto sa 560C sa pinakamainam na konsentrasyon. Bilang karagdagan, magdagdag ng 3 bahagi ng isotonic sodium chloride solution na may pH na 7.2 at 5 bahagi ng 0.1% chromium chloride solution. Ang pinaghalong, paminsan-minsan na pagpapakilos, ay pinananatili sa temperatura ng silid sa loob ng 5 minuto. Pagkatapos ng tinukoy na oras, ang halo ay lubusan na hugasan gamit ang PBS na may pH 7.2, at pagkatapos ay ang inihandang erythrocyte diagnosticums ay muling sinuspinde sa isang preservative sa isang 1% na konsentrasyon. Ang inihandang diagnosticum ay nagpapanatili ng mga pangunahing katangian nito sa loob ng 8 buwan, kung ito ay nakaimbak sa 4°C.

Sa lahat ng mga yugto ng paggawa ng diagnosticum, sinusubaybayan ang self-agglutination. Ang pagiging tiyak ng mga inihandang diagnosticum ay tinutukoy sa pamamagitan ng pagtatanghal ng RNGA, kung saan ang mga karaniwang diagnosticum ng IRT virus, AI - 3, adenovirus, viral diarrhea, pati na rin ang rota at coronavirus antigens ay ginamit bilang antigens.

Kapag nagsasagawa ng RNGA, ang sunud-sunod na double dilution ng test virus-containing material ay inihahanda (20-50% suspension ng fecal samples), at pagkatapos ay isang pantay na dami ng erythrocyte diagnostic fluid ay idinagdag sa bawat balon. Ang mga plato ay dapat na inalog nang lubusan ng maraming beses at iwanan sa temperatura ng silid hanggang sa ganap na manirahan ang mga erythrocytes sa kontrol. Ang isang tagapagpahiwatig ng isang positibong reaksyon ay ang agglutination ng erythrocyte diagnosticum na may agglutination intensity na 2+ sa titer na 1:4 at mas mataas.

Indirect hemagglutination reaction (RIHA).

Ang RIGA ay ginagamit sa dalawang bersyon: na may mga kilalang antibodies upang makita ang mga antibodies na may mga kilalang antibodies upang makita ang mga antibodies. Ang reaksyong ito ay tiyak, at ito ay ginagamit upang masuri ang mga sakit na dulot ng bacteria at rickettsia. Upang maisagawa ang RIGA, ginagamit ang mga diagnostic ng erythrocyte, na inihanda sa pamamagitan ng adsorption ng AG o AT sa mga erythrocytes, depende sa layunin ng pag-aaral (Larawan 10.3). Sa mga positibong kaso, ang antas ng erythrocyte agglutination ay minarkahan ng mga plus. Sinusuri ng apat na plus ang isang reaksyon na may anyo ng isang manipis na pelikula ng malagkit na pulang selula ng dugo (payong) na sumasaklaw sa ilalim ng test tube; ang pagkakaroon ng isang pelikula na may scalloped lace na mga gilid ay ipinahiwatig ng dalawang plus. Ang titer ay itinuturing na pinakamataas na pagbabanto ng materyal na pagsubok na nagdulot ng pagsasama-sama ng mga erythrocytes sa pamamagitan ng dalawang plus.

kanin. 10.3.

1 - pulang selula ng dugo, 2 - erythrocyte AG, 3 - conjugated AG, 4-AT

RHA at hemagglutination inhibition reaction (HAI).

Gaya ng nabanggit na, ang RHA ay nakabatay sa kakayahan ng mga erythrocytes na magkadikit kapag ang ilang antigens ay na-adsorbed sa kanila. Ang allantoic at amniotic fluid, isang suspensyon ng chorion-allantoic membranes ng mga embryo ng manok, mga suspensyon at mga extract mula sa mga kultura o organo ng mga hayop na nahawaan ng mga virus, at ang katutubong nakakahawang materyal ay ginagamit bilang materyal sa pagsubok para sa hemagglutination. Ang RGA ay hindi isang serological na reaksyon, dahil ito ay nangyayari nang walang paglahok ng immune serum at ginagamit upang piliin ang gumaganang pagbabanto ng isang antigen para sa pagtatanghal ng isang RGA o ang pagkakaroon ng isang antigen (virus) sa materyal ng pagsubok (halimbawa, para sa trangkaso. ). Gumagamit ang reaksyon ng mga pulang selula ng dugo mula sa mga hayop, ibon, at tao na may pangkat ng dugo I (0). Upang mag-set up ng tinatayang RGA, ang isang patak ng 5% na suspensyon ng mga erythrocytes at isang patak ng materyal na pansubok ay inilalapat sa isang glass slide at pinaghalo nang lubusan. Kung positibo ang resulta, pagkatapos ng 1-2 minuto ang hitsura ng flocculent agglutination ng mga erythrocytes ay sinusunod sa macroscopically. Upang i-set up ang RGA sa isang nakabukas na hilera, ang dobleng pagtaas ng mga dilution ng materyal sa pagsubok ay inihanda sa physiological solution sa dami ng 0.5 ml sa mga balon ng mga polystyrene plate. Ang 0.5 ml ng isang 0.25-1% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo ay idinagdag sa lahat ng mga tubo ng pagsubok. Ang mga resulta ay isinasaalang-alang pagkatapos ng kumpletong sedimentation ng mga erythrocytes sa kontrol (mga pulang selula ng dugo + solusyon sa asin). Ang reaksyon ay isinasaalang-alang ng likas na katangian ng erythrocyte sediment. Sa mga positibong kaso, ang antas ng aglutinasyon ay minarkahan ng mga plus. Ang isang reaksyon na mukhang isang manipis na pelikula ng malagkit na mga pulang selula ng dugo na sumasaklaw sa ilalim ng isang test tube (payong) ay tinasa na may apat na plus; isang reaksyon na may mga puwang sa pelikula ay minarkahan ng tatlong plus; ang pagkakaroon ng isang pelikula na may scalloped lacy Ang mga gilid ng malagkit na pulang selula ng dugo ay minarkahan ng dalawang plus; isang flocculent sediment ng mga pulang selula ng dugo na napapalibutan ng isang zone ng agglutinated lumps erythrocytes, ay tumutugma sa isang plus. Ang isang malinaw na tinukoy na erythrocyte sediment, na hindi makilala mula sa kontrol, ay nagpapahiwatig ng kawalan ng agglutination. Ang titer ay itinuturing na pinakamataas na pagbabanto ng materyal na pagsubok na nagdulot ng pagsasama-sama ng mga erythrocytes sa pamamagitan ng dalawang plus. Kung positibo ang resulta ng RGA, ipagpapatuloy ang pag-aaral, na tinutukoy ang uri ng nakahiwalay na virus gamit ang RT GA na may sera na partikular sa uri. Ang RTGA ay batay sa pag-aari ng antiserum upang sugpuin ang viral hemagglutination, dahil ang virus na na-neutralize ng mga partikular na antibodies ay nawawalan ng kakayahang pagsama-samahin ang mga pulang selula ng dugo. Para sa pansamantalang pag-type ng mga virus, ginagamit ang droplet method sa salamin. Upang tiyak na maitatag ang uri ng nakahiwalay na virus at ma-titrate ang mga antibodies sa sera, isang pinalawak na X-ray test ang inilalagay sa mga test tube o mga balon. Para sa layuning ito, ang double dilutions ng sera ay inihanda sa physiological solution at ibinibigay sa 0.25 ml. Sa serum dilutions magdagdag ng isang patak ng materyal na naglalaman ng virus at isang patak ng 1% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo. Kapag gumagamit ng RTGA upang matukoy ang uri ng virus, ginagamit ang sera na partikular sa uri, na idinagdag sa isang pantay na dami ng gumaganang pagbabanto ng AG. Ang uri ng nakahiwalay na virus ay tinutukoy ng partikular na immune serum na nagpakita ng pinakamataas na titer ng antibody sa virus na ito. Ang RGA at RTGA ay malawakang ginagamit para sa pagsusuri ng mga impeksyon sa viral (tick-borne encephalitis, trangkaso, atbp.) upang matukoy ang mga partikular na antibodies at makilala ang maraming mga virus sa pamamagitan ng kanilang mga antibodies.